Oktatási segédanyag kórélettani gyakorlatvezetők részére

Összeállította: Debreczeni Lóránd és Lelkes Gábor.

1. Pre-analitika

1. 1. Mintavétel

A gépi hematológiai vizsgálathoz a vért etiléndiamintetraacetátot (EDTA) tartalmazó egyszer használatos csőbe kell levenni. Mintavétel után nem túl erős forgatással a száraz alvadás-gátlót a vérben gyorsan fel kell oldani. Helytelen mintavétel esetén a vérben fibrinszálak képződhetnek, ami az eredményt meghamisítja. A levett vért négy órán belül le kell mérni, mivel ezután a granulociták gyorsan elpusztulnak, amelyeket az analizátor nem tud azonosítani. Lipémia, 20G/l fölötti fehérvérsejt-szám, 700G/l fölötti trombocitaszám esetén - a minta fokozott turbiditása miatt - a ténylegesnél magasabb hemoglobinértéket kaphatunk (kb. 30g/l). Ritkán bár, de előfordul, hogy a vörösvérsejt paraméterek „nonszensz” eredményeit a vérben lévő banális hideg - agglutininek okozzák, különösen akkor, ha a mintavétel és a mérés között hosszabb idő telik el. Ilyenkor a minta mikroszkópos vizsgálata lehet segítségünkre: a kenetben extrém mértékű vörösvérsejt agglutinációt látunk. A minta testhőmérsékletre történő melegítésével az automatákkal kapott értékek normalizálódnak. A krioglobulinémia pszeudoleukocitózist okoz, ami szintén a vér felmelegítésével normalizálódik. A krioglobulint tartalmazó vérből nem lehet jó kenetet húzni, illetve az alvadásgátolt vér hűtőszekrényben megdermed. Jóval gyakrabban fordul elő az EDTA-indukálta pseudotrombocitopénia. Az alvadás-gátlóként használt EDTA a vizsgált személyek kb. 0.1%-ában nem pontosan ismert, részben immunológiai mechanizmussal trombocita-aggregációt okoz, amit az analizátor kifejezett trombocitopéniaként értékel. A kenetben ilyenkor nagyszámú trombocita-aggregátumot látunk. Az aggregációra egyébként a rendellenes, cikcakkos lefutású hisztogram, illetve ötpopulációs automaták esetében direkt üzenet is felhívja a figyelmet. A vizsgálatot EDTA-mentes vérből (ujjbegyből vett vér novokainnal hígítva Bürker-kamrában, vagy citrátos egyszer-használatos csőbe levett vér automatában) megismételve normális értéket kapunk.

1. 2. Reagensek

1. 2. 1. Hemoglobin mérése

A Hgb mérésére használt oldat pH-jának 7 körül kell lenni, mivel savanyú oldatból mérgező HCN kerülhet a levegőbe, továbbá a cianid-koncentráció annyira lecsökkenhet, hogy már nem alakul az összes hemoglobin cianidkomplexszé. Emiatt tévesen kis hemoglobin koncentrációkat mérhetünk. A transzformáló oldat cianidtartalma miatt csak biztonsági pipettával, pipettázó ballonnal, adagolóval stb. mérhető ki.

1. 2. 2. Minta – reagens arány

Az irodalom adatai szerint a helyes minta-reagens hígítási arány kialakulásának hiányáért többnyire a mérő-kapilláris eldugulását teszik felelőssé mely az apró fibrinszálak és sejt-aggregátumok következménye. A sejtszámlálót tanácsos gyári vérvételi eszközökkel használni, a külső dilutoros készülékek esetében a műanyag edénykék mosogatásával nem érdemes kísérletezgetni. Az öblítővizet szemcsementesre szűrni úgyszólván lehetetlen.

A hígító oldat izotóniás sóoldat, el kell kerülni a sejtek alakváltozását. A hígító oldat a valóságban bonyolultabb. A hematológiai automatákban a hígító oldatok egyúttal rendszerfolyadékok, amelyekkel a műszer összes hidraulikai eleme állandóan fel van töltve. A rendszerfolyadékokat megbízható gombásodás-algásodás elleni adalékkal kell kiegészíteni, mivel elalgásodásuk egy-két napon belül illuzórikussá teheti a méréseket. Ezeknek az oldatoknak abszolút mentesnek kell lenni lebegő szennyezéstől is, hiszen méréstartományuk már jóval a kis trombociták 3-4 femtoliteres térfogata alatt kezdődik.

A levegőben szálló és az eszközökre tapadó por legalább ugyanennyire zavaró.

1. 3. Preanalitikai hibák

1. 3. 1. Csak vénás vér!

Elektronikus sejtszámoláshoz csak vénás vért lehet használni. Az eredmények megbízhatósága szempontjából döntő fontosságú, hogy a hígító oldat ne tartalmazzon zavaró részecskéket, ezért annak tisztaságát naponta többször ellenőrizni kell (számolás vér nélkül). Az összes alkalmazott edényt és reagenst pormentesen kell tárolni.

1. 3. 2. pH

A hígító oldat pH-ját gyakorta ellenőrizzük, mert az eltérés a pH = 7,4-es értéktől a sejtek térfogatváltozását okozhatja. A hígító oldatnak izotóniásnak kell lenni, ha nem az, különösen a vörösvérsejt-térfogat és az abból számított hematokrit - érték lesz hibás.

1. 3. 3. Keverés

Ha a hígított vér nem megfelelően keveredett a szaponinnal, vagy más felületaktív anyaggal, a vörösvérsejtek feloldódása tökéletlen, az összecsapzódott alakos elerriek tévesen magas fehérvérsejt-számot adnak.

A vérsejtek a hígított mintában viszonylag gyorsan ülepednek, ezért a (fél)automatikus módszerek esetében közvetlenül mérés előtt a sejtszuszpenziót ismét gondosan össze kell keverni (pl. alacsony fordulatú keverő-„hengerek” alkalmazásával).

2. Automatizált mérés (analitika)

Az automatizált mérés hematológiai analizátorokban Coulter-elv alapján, az áramlási citometria és a konduktimetria kombinálásával történik. A számlálók a vörösvérsejteket és a vérlemezkéket ugyanazon csatornában egyidejűleg mérik, amit nagymértékben eltérő méretük tesz lehetővé. A számlálók nemcsak a sejtszámokat, hanem a térfogat-eloszlási hisztogramokat is feltüntetik, vagyis 10⁵ sejt megszámlálásával megadják azok méret szerinti eloszlását. A hemoglobin mennyiségét fotometriás eljárással határozzák meg. A fehérvérsejt és a retikulocita mérésekre eltérő festési és mérési technikákat alkalmaznak.

Kontroll vérmintával naponta legalább egyszer meg kell győződni arról, hogy a készülék hitelesítése megfelelő.

2. 1. Hemoglobin, vörösvérsejt és vérlemezkék

2. 1. 1. Hemoglobin

A hemoglobin koncentráció meghatározásának referencia módszere a hemiglobincianid eljárás; a vérhez káliumferricianidot és nátrium cianidot adva, a methemoglobinná oxidálódott hemoglobin a cianid ionnal stabil, 540 nm-en abszorbciós maximumot mutató komplexet alkot. (A keletkezett hulladékot a „veszélyes” kategória utasítása szerint kell kezelni). Az analizátorokban a hemoglobint mennyiségét újabban nem a referencia módszerrel, hanem valamilyen más módon, pl. nátrium laurilszulfát alkalmazásával határozzák meg.

2. 1. 2. Vörösvérsejtek, vérlemezkék

A vörösvérsejtszám, a hematokrit (PCV = Packed Cell Volume, Htc) és a hemoglobin koncentráció alapján három ún. származtatott paramétert kapunk: Hct/vörösvérsejt szám = átlagos vörösvérsejt térfogat (MCV = Mean Cell Volume), Hb/vörösvérsejt szám = átlagos hemoglobin tartalom (MCH = Mean Cell Hemoglobin), Hb/Hct = átlagos sejt hemoglobin koncentráció (MCHC = Mean Hemoglobin Concentration). Az automaták a hematokritot a vörösvérsejtszám és az MCV szorzataként adják meg, szemben a referencia módszernek számító eljárással, ahol hematokrit centrifugában direkt módon határozzuk meg. Ezzel a módszerrel mintegy 2%-al magasabb eredményt kapunk, mint a gépi eljárással, mivel az automaták által megadott értékben a sejtek közötti tér nem szerepel. A származtatott paraméterek közül elsősorban az MCV-nek van jelentősége az anémiák típusának megállapításánál.

A vörösvérsejt és a vérlemezke szám meghatározására impedancia mérést végeznek. Az impedancia reciproka a konduktivitás, mely mérést konduktimetria-nak nevezünk. A készülékben az erősen felhígított vér sejtes elemei két elektróda között igen kis nyíláson haladnak át, gyakorlatilag egyenként. Minden egyes sejt – mivel rosszabb vezető, mint a hígító médium – nagyságától függően csökkenti az elektromos áramot. Az így létrehozott impulzusok mérhetőek és számlálhatók, így meghatározhatóvá teszik az egységnyi térfogat vérben lévő sejtek számát és azok átlagos térfogatát. Az analizátor hidrodinamikai fókuszálást alkalmaz, azaz kétirányú folyadéksugár segítségével egyenként sorba állítja a sejteket mielőtt még a mérő nyíláson áthaladnának. Tehát a vörösvérsejtek és a trombociták számolása egyidejűleg történik és a dinamikus küszöbértéknek nevezett sejtnagyság alapján különíti el a trombocitákat a vörösvérsejtektől. A sejtek alakjának változatlanságát az izotóniás hígító sóoldat biztosítja.

A vörösvérsejtek térfogat szerinti eloszlása szimmetrikus (Gauss) haranggörbével jellemezhető; bizonyos esetekben „kétpúpú” görbét látunk, ami méret szempontjából két jól elkülönülő vörösvérsejt populáció jelenlétére hívja fel a figyelmet. Ilyen görbét láthatunk vértranszfúzió után, illetve anaemia perniciosa és vashiányos anémia kezelése során.

Az 1SD és az MCV hányadosa az RDW-CV (RDW = Red Cell Distribution Width). Az MCV mellett szintén lényeges paraméter, emelkedett RDW anizocitózist jelez. Mivel az MCV a nevezőben szerepel, az érték nemcsak az anizocitózis mértékétől függ, mikrocitózisban nagyobb, makrocitózisban kisebb értéket kapunk. Ezt küszöböli ki az RDW-SD, ami a vörösvérsejtek térfogat-eloszlási hisztogramjának a görbe magassága 20%-ánál mért szélessége. Az analizátorok az átlagos trombocita térfogatot (MPV = Mean Platelet Volume) és a trombociták térfogat-eloszlási görbéjének szélességét (PDW = Platelet Distribution Width) is megadják, de ezek nem annyira informatívak, mint az MCV és a RDW. (A trombociták térfogat-eloszlása log-normális). Emelkedett MPV fokozott trombocita képzésre utalhat, mivel a fiatal vérlemezkék nagyobbak az idősebbeknél. A trombociták hisztogramjának rendellenes, cikkcakkos lefutása trombocita-aggregátumok jelenlétére hívhatja fel a figyelmet.

2. 2. Fehérvérsejtek

Hárompopulációs hematológiai analizátor referencia értékei

Paraméter	Egység	Unisex vagy nő	Férfi
WBC = fehérvérsejt-szám	G/L	4.0 - 10.0
W-SCR = ly %	%	20 - 40
W-MCR = mo+eo+ba %	%	4 - 12
W-LCR = granulocita %	%	50 - 70
RBC = vörösvérsejt szám	T/L	4.0 - 5.2	4.5 - 5.9
Hgb = hemoglobin	g/L	120 - 160	140 - 180
Hct = hematocrit	L/L	0.36 - 0.46	0.41 - 0.53
Vérlemezke szám	G/L	150 – 400

2. 2. 1. Hárompopulációs hematológiai analizátor

A fehérvérsejtek számolásához a vörösvérsejteket előbb hemolizálni kell, ami detergens segítségével történik. Detergensekkel a visszamaradó fehérvérsejtek membránja is permeabilizálható (részleges lízis), ami hypertóniás oldattal történő zsugorítást követően lehetőséget nyújt a fehérvérsejt populációk bizonyos fokú elkülönítésére, ugyanis az eljárással három jól elkülöníthető méretű populációt kapunk. A nagy sejtek (LCR = Large Cell Ratio) a neutrofíl granulocitáknak, a kis sejtek (SCR = Small Cell Ratio) a limfocitáknak, míg a közepes méretű sejtek (MCR = Middle Cell Ratio) az eozinofíleknek, a bazofíleknek és a monocitáknak felelnek meg. Ilyen módon differenciálnak a hárompopulációs hematológiai analizátorok és a leleten a fehérvérsejt-szám mellett három sejtpopuláció százalékos és abszolút értéke is látható.

2. 2. 2. Ötpopulációs hematológiai analizátor

A fehérvérsejt-szám mérése és a fehérvérsejt populációk differenciálása fotometriásan történik.

Az alkalmazott diszkriminációs eljárások készülékekként eltérnek. A mintából fehérvérsejt hígítóval a vörösvérsejteket hemolizálva készített sejtszuszpenziót különféle lézerrel megvilágítva a sejtek fényszórásának vizsgálata több detektorral történik: az optikai tengelyben, az optikai tengelyhez képest különböző szögekben mérik a szórt, vagy depolarizált, vagy fluoreszcens fényt. Többdimenziós mátrix keletkezik, amit az analizátor értékel. Az eredmények numerikusan és „felhődiagram” formájában is megjeleníthetők.

Referencia értékek ötpopulációs analizátoron

Paraméter	Egység	Unisex vagy nő	Férfi
Hct = hematokrit	L/L	0.37 - 0.47	0.42 - 0.52
Hgb = hemoglobin	g/L	120 – 160	140 - 180
WBC = fvs szám	G/L	4.0 – 10.0
Neutrophil	%	37 – 80
Lymphocyta	%	10 – 50
Monocyta	%	< 9.0
Eosinophil	%	< 4.0
Basophil	%	< 1.0
RBC = vvt szám	T/L	4.0 - 5.2	4.5 - 5.9
Vérlemezke szám	G/L	150 – 400

Mérési eredmények:

WBC (fehérvérsejt szám, G/L)

NEU % (granulocita %)

LY % (lymphocyta %)

MONO % (monocyta %)

EO % (eosinophil %)

BASO % (basophil %)

RBC (vörösvérsejt szám, T/L)

PLT (trombocita szám, G/L)

HGB (hemoglobin g/L)

A több tízezer mérési eredmény alapján gyakorisági eloszlást (hisztogram) is meghatározhatunk, melynek kitüntetett értékei:

MCV (vörösvérsejt térfogat).

RDW (vörösvérsejt eloszlás szélessége)

MPV (vérlemezke térfogat).

PDW (vérlemezke eloszlás szélessége)

Számolt értékek:

Neu (granulocita, G/L)

Ly (limphocyta, G/L) . Mo (monocyta, G/L) Eo (eosinophil, G/L)

Baso (basophil, G/L)

HCT = (RBC x MCV / 10) (haematokrit L/L)

MCH = (HGB/RBC x 10) (vörösvérsejt Hgb tartalma, pg)

MCHC = (HGB/HCT x 100) / (vörösvérsejt Hgb konc.)

PCT = (Vérlemezke x MPV / 10) thrombokit

A mért és származtatott paraméterekből a kórházi információs rendszerben is képezhetők a számolt paraméterek.

Az ötpopulációs hematológiai analizátorok tehát mind az öt fehérvérsejt féleség elkülönítésére alkalmas készülékek, amelyek az egyes populációk százalékos arányán és abszolút számán kívül az eredményeket felhődiagram formájában is prezentálják, továbbá a kóros eltérésekre (balratolódás, magvas vörösvérsejt, trombocita-aggregátum, stb.) is felhívják a figyelmet.

2. 3. Retikulociták

Az érett vörösvérsejtek nem tartalmaznak RNS-t, míg az éretlen vörösvérsejtek riboszómái különféle festékekkel megjelölhetők. A vörösvérsejtek nagysága impedancia-elven meghatározható, míg a megjelölt vörösvérsejtek mérésére az ötpopulációs hematológiai analizátorok lézeres technikája alkalmas. A detektálás történhet fényszórás vagy fényabszorpció révén (új-metilénkék festés), illetve az alkalmazott festék fluoreszcenciája segítségével (tiazol-orange).

2. 4. A csontvelő sejtjeinek vizsgálata

A hematológiai analizátorokat a perifériás vér (peripheral blood = PB) vizsgálatára használják az általános célú központi laboratóriumokban. 1997-98-ban jelent meg D’Onofrio és mtsai közleménye (D’Onofrio G, G Zini, M Tommasi, L Laurenti, L van Hove, S Sica, G Leone: Automated analysis of bone marrow: routine implementation and differences from peripheral blood. Laboratory Hematology 4: 71-79. 1998.), amely ötpopulációs hematológiai analizátort alkalmaz a csontvelő sejtjeinek vizsgálatára (bone marrow = BM).

A csontvelő kenet leletezése megfelelő jártasságú szakorvos, vagy szakképesítéssel rendelkező szakorvos feladata, akinek munkáját a jövőben segíthetik a modern ötpopulációs hematológiai analizátorok.

3. Hitelesítés, poszt-analitika

A hematológiai analizátorok mind hardware, mint software oldalon több kalibrációs és beállítási lehetőséget kínálnak, pl.: 1) a mintafelszívó cső beállítása, 2) a minta keverő beállítása, 3) a keverési sebesség beállítása, 4) pneumatikus egység ellenőrzése, nyomásmérők, vákuum, 5) hemoglobin vak érték ellenőrzése, 6) hematokrit manuális kalibrálása, stb.

3. 1. Kontrollok

A mérőrendszer ellenőrzésére gyári, célértékkel rendelkező, általában humán vörösvértesteket, a fél-életidők miatt emlős fehérvérsejeteket és emlős vérlemezeket tartalmazó háromszintű („alacsony”, „normál” és „magas”) kontrollokat használunk, melyeket 2-8 C°-on tárolunk. A kontroll nem alkalmas kalibrálására vagy mikroszkópos differenciál-analízisre. Felhasználható a szállítástól függően, de legfeljebb 12 hétig a megfelelő tárolás mellett.

A kontrollok adatai alapján be kell írni a nem és korfüggő referencia és alarm tartományokat.

A háromszintű kontrollok alkalmazásával rendszeresen ellenőrizni kell (a példákban az elvárható %-os CV-értékeket tüntettük fel):

1)a „carry-over” (RBC, Hgb <0.5%, WBC, Hct, Plt <2%) értéket,

2)a linearitást (RBC, WBC, Hct <2%, Plt <5%).

3)az intra-assay (Hgb<1%, RBC, WBC<2%, Plt<5%) méréseket,

4)a „day to day” (Hgb<1%, RBC<1.5%, WBC<3%, Plt<4%) pontosságot,

3. 2. Megjegyzések

A hemoglobin-mérést befolyásolja a zavaros minta (lipidek), ha a fehérvérsejt-szám nagy, ha a vörösvérsejtek agglutinálódnak, ha az óriási vérlemezkék száma sok.

A vörösvérsejt-mérést befolyásolja, ha a vörösvérsejtekhez hozzáadódnak a fehérvérsejtek, ha a fehérvérsejtek száma sok (>50.000 G/L), ha a vörösvérsejtek agglutinálódnak, hideg agglutininek.

A vérlemezke mérést befolyásolja, ha a vörösvérsejtek mérete kicsi, ha a vörösvérsejtek agglutinálódtak, a kemoterápia a vérlemezkék fragilitását fokozza, hemolizis.

A fehérvérsejt mérést befolyásolják az éretlen fehérvérsejt alakok, a rosszul lizált vörösvérsejtek, myeloma multiplex, hemolizis, leukémia, kemoterápia (a cytotoxikus anyagok a fehérvérsejtek fragilitását fokozzák), krioglobulinok, zavarosság, agglutinált vörösvérsejtek.

3. 2. 1. Normál és extrém értékek

Ha a mérés eredménye meghaladja a nem és kor szerinti referencia értékhatárt, vagy a felhasználó által definiált alarm-határt az analizátor (betű, nyíl, hang, stb.) üzenettel jelez. Ilyenkor a Minőségi Könyvben rögzítettek szerint a technikai (elő)validáló ellenőrzi és megismételteti a mérést.

3. 2. 2. Mérési hibajelzés

Ezek az üzenetek általában a mérés elvégezhetőségével kapcsolatosak: vagy extrém alacsony a mért érték, vagy (sokszor a készülék mérési kapacitását is meghaladó) extrém magas érték, vagy üzemzavarra utalnak. A készülék működésével összefüggő, gyakran előforduló (hiba)üzenetek (néhány példa):

BACKGROUND ERROR

ENTER DATE: írja be a keltezést!

SAMPLE BLANK (pl. kiégett a hemoglobin lámpa).

HOST COMPUTER ERROR

NO HGB REAGENT: elfogyott a reagens.

NO WBC REAGENT: elfogyott a reagens.

NO THERMAL PAPER: kifogyott a papír, amit sípoló hang is jelez.

RINSING: mosás.

REMOVE COAG WBC: WBC kapillárisban a mérési idő túl hosszú, esetleg alvadék miatt. Hangjelzés is kísérheti.

3. 2. 3. Morfológiai üzenetek

Ezek általában a vörösvérsejt és a vérlemezkék nagyság (256 csatorna az x tengelyen) - gyakoriság (y tengely) görbéinek értékelésével, pl. a kétféle sejttípus méréstechnikai elválaszthatóságával, azaz a „mozgó küszöb” megválasztásával kapcsolatosak. De üzenetek definiálhatók az ötpopulációs analizátorokban a különféle fehérvérsejt-felhők elválasztására is.

3. 2. 4. Patológiai információk

Általában a kóros értékek jelölésére használják, pl.: a felhasználói definició szerint, ha a fehérvérsejt-szám meghaladja a referencia tartomány felső értékét, akkor automatikusan nyomtatható a „leukocytosis” vélemény. Ha a felhasználói definició szerint a trombocita-szám kisebb a referencia tartomány alsó értékénél, akkor automatikusan nyomtatható a „thrombopenia” vélemény.

Ha a vörösvérsejt szám kisebb a referencia tartomány alsó értékénél akkor anaemia, ha egy vörösvérsejt hemoglobin tartalma kisebb a referencia tartomány alsó értékénél (MCHC < 300 g/L) akkor pl. az archaikus „hypochrom” megállapítás is nyomtatható. Ha lehetőség van logikai ÉS műveletre akkor pl. az „anaemia” (igaz) ÉS a „hypochrom” (igaz) együttes előfordulása (azaz mindkét állítás igaz) nyomtatható a „hypochrom anaemia” (az eredmény is igaz) minősítés.

3. 3. Értékelés

A mérési eredményeket elfogadhatjuk, megismételhetjük vagy mikroszkóposan ellenőrizhetjük.

3. 3. 1. Ismételt mérés

A méréseket ismételni kell a mérési sikertelenség miatt, mely az elővalidálás (technikai validálás) része. Célszerű a laboratóriumban rendelkezésre álló legnagyobb teljesítményű analizátoron a mérést megismételtetni. Általános profilú egészségügyi intézményben a paciens-mintáik mérését 5-10%-ban kell ismételni, vagy mikroszkóposan ellenőrizni.

Különféle (pl. statisztikai) módszerekkel, vagy tapasztalati úton meghatározhatunk egy paraméterre bizonyos mérési küszöb-értékeket, melynek alapján a teljes mérést megismételjük. Néhány ajánlott limit:

1)Hemoglobin <60 g/L, vagy >180 g/L,

2)Vörösvérsejt >6.0 T/L, vagy < 2.0 T/L,

3)MCHC > 360 g/L,

4)Vérlemezkék száma <30 G/L, vagy >600 G/L.

3. 3. 1. Mikroszkópos ellenőrzés

Az irodalom nem egységes az automatizált mérési eredmények alapján további mikroszkópos vizsgálatok elrendelésében: az elméleti tudás mellett a gyakorlati tapasztalattól, az alkalmazott mérési technikától, a rendelkezésre álló idő, az anyagi és humán erőforrásokig számos tényező befolyásolja a döntéseket. A validálási eljárásokat pontosan rögzíteni kell a Minőségi Könyvben. Meghatározhatunk egy paraméterre bizonyos mérési küszöb-értékeket (klinikai elemi adatok vagy az iránydiagnózis ismerete elősegíti a döntést), melynek alapján a festett készítmény mikroszkópos ellenőrzését elvégezzük. Néhány ajánlás:

1)Fehérvérsejtszám <2.0 G/L vagy > 15.0 G/L,

2)A fehérvérsejtszám „normális”, de

a)ly<10% vagy ly>50%, vagy

b)közepes sejtek (mo+eo+baso) >12%, vagy

c)neu>90%, vagy

d)mono > 20%, vagy

e)eo > 14%, vagy

f)baso > 2%,

3) Vérlemezkék száma <50 G/L.

4. MINŐSÉGELLENŐRZÉS

4. 1. Belső minőségbiztosítás

A belső minőségbiztosítás az analizátor gépkönyvének javaslatai alapján előírja a rendszeres heti, illetve időszakos karbantartást.

A rendszeres kontroll mérésen túl az analizátor meghibásodásait, javítását és/vagy műszaki karbantartását követően, valamint bármilyen gyanú esetén soron kívüli ellenőrzés szükséges, és ezek eredménye és indoka szintén dokumentálandó a fentiek szerint.

4. 2. Mintavétel

A jó minőségű minták készítése érdekében megfelelő technikát kell alkalmazni a mintavételnél, a mintakezelésnél és tárolásnál egyaránt. A teljes vérminta gyűjtését a „Standard Procedures for the Collection of Diagnostic Blood Specimens by Venipuncture”, a minták gyűjtését pedig a „Standard Procedures for the Collection of Diagnostic Blood Specimens by Skin Puncture” című kiadványokban leírtak szerint kell végezni. (NCCLS, National Committee for Clinical Laboratory Standards). A véralvadás-gátló anyagot megfelelő vér/antikoagulans arányban alkalmazottan az EDTA választékból (Na₂EDTA, K₂EDTA, vagy K₃EDTA) kell kiválasztani. A mintavételt követően sürgősen el kell végezni az analizálást. A teljes vér analízist 4 órán belül kell elvégezni.

4. 3. Véletlenszerű hibák, rendszeres hibák

Az analízis hibák lehetnek véletlenszerűek (random), vagy rendszeresek (szisztema-tikusak). Például: véletlenszerű hibát okozhat a hibás minta-címkézés, a koagulált minta, vagy bizonyos hibás készülék-működés is. Az ilyen típusú hibákat meglehetősen nehéz reprodukálni és emiatt behatárolásuk is problematikus. Szerencse, hogy véletlenszerű hibák ritkán lépnek fel. A legtöbb véletlenszerű hiba a kezelő-személytől ered, és gondos, figyelmes kezeléstechnikával többnyire csökkenteni is lehet. (Minden minőségbiztosítási program fontos elem a tanulás és az ismétlés).

A rendszeres hibák oka gyakran a drift (a munkapont, azaz a hitelesítő vonal vándorlása), a linearitás-eltérés. A következményes napi értékeltolódások csekélyek de a minőségbiztosítás un. Westgard szabályai (pl.: az „utolsó” négy kontoll középérték ± 1SD értéket meghaladja az új kontroll érték, vagy az utolsó 10 kontroll a „grand”-átlag „egyik” oldalán [felett vagy alatt] helyezkedik el) segítenek a felismerésben (Westgard JO, DD Koch, EF Quam, DH Feldbruegge, DE Dowd, PL Barry: Selection of medically useful Quality Control procedures for individual tests done in a multitest analytical system. Clin. Chem. 36:230. 1990). Rendszeres hiba oka lehet pl. a mérőrés fokozatos eltömítődése fehérjék kicsapódása miatt.

Ajánlott irodalom: Lelkes Gábor: Hematológia, 6. fejezet, In Gyakorlati Laboratóriumi Medicina (Szerkesztette: Debreczeni Loránd), Therapia Kiadó, Budapest 2002.

Egyes ábrákat a megadott cég reklámanyagából másoltuk oktatási célra.

1. ábra: A SYSMEX XE-2100 Hematológiai analizátor működési elve (fenn) és a „felhők” a fehérvérsejtek differenciálása (lenn).

2. ábra: Normális vérkép (CELL-DYN 3500 Hematológiai Analizátor, Abbott). (Az y-tengely nagyított). Az ábra bal alsó sarkában a referencia-tartományok láthatók, jobb oldalon a mikroszkópos ellenőrzés dokumentációs segédanyaga. Színes nyomtatón a felhők jelentése:

1-es részábra 0°/10°: ly-mono-degranulált baso sejtek szétválasztása,

2-es részábra 90°D/90°: eo és baso szétválasztása,

10-es részábra: vörösvérsejt hisztogram,

4-es részábra: vérlemezke hisztogram.

3. ábra: Normális vérkép (CELL-DYN 3500 Hematológiai Analizátor, Abbott). (Az y-tengely nagyított). Az ábra bal alsó sarkában a referencia-tartományok láthatók. A mért értékek a referencia tartományon belül találhatók és ezért nem nyomtatja a fekete-fehér nyomtató a mikroszkópos ellenőrzéshez szükséges rovatokat.

4. ábra: Krónikus lymphoid leukémia (CELL-DYN 3500 Hematológiai Analizátor, Abbott). Színes nyomtatás. (Az y-tengely nagyított). A gépi 98.2%-os ly arányt a mikroszkópos ellenőrzéskor 96%-nak találták. Az ábra bal alsó sarkában a felhasználói definíciók szerinti minősítések, jobb oldalon a mikroszkópos ellenőrzés dokumentációs segédanyaga láthatók.

5. ábra: Basophilia, anisocytosis, thrombocytosis. (CELL-DYN 3500 Hematológiai Analizátor, Abbott). Fekete-fehér nyomtatás. (Az y-tengely nagyított). Az ábra bal alsó sarkában a referencia-tartományok és a felhasználói definíciók szerinti minősítés, jobb oldalon a mikroszkópos ellenőrzés dokumentációs segédanyaga láthatók.

6. ábra: Mononucleosis infectiosa (CELL-DYN 3500 Hematológiai Analizátor, Abbott). Színes nyomtatás. (Az y-tengely nagyított). Az ábra bal alsó sarkában a felhasználói definíciók szerinti minősítés, jobb oldalon a mikroszkópos ellenőrzés dokumentációs segédanyaga láthatók.

7. ábra: Thrombocytosis (CELL-DYN 3500 Hematológiai Analizátor, Abbott). Színes nyomtatás. (Az y-tengely nagyított). Az ábra bal alsó sarkában a felhasználói definíciók szerinti minősítés látható.

8. ábra: PENTRA 120RET hematológiai analizátor monitor-ábrája (Abx, France). (Az y-tengely nagyított).

9. ábra: PENTRA 120RET hematológiai analizátor nyomtatott eredmény (Abx, France). A minősítés: lymphopenia, monocytosis. (Az y-tengely nagyított).